藍(lán)曉科技rProtein A填料通過(guò)FDA DMF備案

藍(lán)曉科技自主開(kāi)發(fā)擁有專利的rProtein A系列蛋白A親和填料于2022年7月14日通過(guò)美國(guó)FDA DMF備案（MF#：037326），成為國(guó)內(nèi)為數(shù)不多的通過(guò)FDA DMF備案的國(guó)產(chǎn)填料供應(yīng)商。這意味著使用藍(lán)曉科技相關(guān)產(chǎn)品的客戶，在向FDA提交進(jìn)行新藥注冊(cè)的監(jiān)管備案文件中可直接引用DMF備案資料，而無(wú)需再提供有關(guān)原料和輔料的具體信息。

FDA DMF備案rProtein A填料介紹

rProtein A Seplife Suno是藍(lán)曉科技應(yīng)對(duì)抗體客戶需求推出的Protein A親和層析填料，以球形，高交聯(lián)瓊脂糖凝膠為基質(zhì)，通過(guò)自主創(chuàng)新技術(shù)將耐堿性重組蛋白A鍵合到該基質(zhì)上?？梢蕴禺愋缘嘏c抗體的Fc區(qū)結(jié)合，用于抗體（單抗和多抗）的分離純化，只需一步親和層析，即可從腹水、血清或培養(yǎng)液等樣品中得到高純度的抗體。

具有以下特點(diǎn)

?自主研發(fā)，品質(zhì)保證，專利保證 

?高載量：5min保留時(shí)間載量80mg/ml

?耐堿性好：耐受0.5M NaOH

?完整的支持文件：RSF、DMF、MSDS、TSE/BSE

?低配基脫落：小于 2 ppm

?貨期短，1-2周可以交

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概論

重組IgG類抗體在表達(dá)過(guò)程中經(jīng)常伴隨著相對(duì)較高水平的產(chǎn)品相關(guān)雜質(zhì)，這些雜質(zhì)主要從重鏈同二聚化、重鏈-輕鏈錯(cuò)配、不同鏈的不平衡表達(dá)和分子間錯(cuò)聯(lián)引起的。盡管通過(guò)使用抗體設(shè)計(jì)策略可以提高正確配對(duì)率,但是完全避免是不可能的。同時(shí)在經(jīng)典三步法層析純化抗體的工藝中，Protein A 親和層析低pH洗脫及低pH病毒滅活的過(guò)程也會(huì)產(chǎn)生一部分聚集體，然而其中一些副產(chǎn)品與目標(biāo) IgG生物特性比較相似，它們的去除對(duì)下游工藝提出了重大挑戰(zhàn)?？贵w藥制備工藝中聚集體及片段的去除是抗體藥下游工藝的重要組成部分。

Protein A親和層析階段

Protein A 親和層析時(shí)通常用pH5.0的緩沖液加1M NaCl進(jìn)行淋洗以減少洗脫液中HCP的殘留，再用pH 3.5的緩沖液一步洗脫IgG分子，沒(méi)有很好的達(dá)到去除聚集體和片段的效果，但一些研究表明在pH 線性梯度洗脫條件下半抗主要集中在前鋒，填料的分辨明顯提高了,因半抗包含一個(gè)Fc區(qū)，所以比雙抗蛋白跟填料結(jié)合力比較弱，容易洗脫下來(lái)。同時(shí)Protein A親和層析階段去除聚集體及片段也受其結(jié)合載量，特異性，分辨率等多種因素的影響。

多模式層析去除聚集體及片段

圖1：藍(lán)曉科技多模式層析結(jié)構(gòu)示意圖

多模式層析去除抗體中的聚集體及片段案例：

樣品：rProtein A Seplife Suno洗脫液(pH7.83， cond:11.84mS/cm，conc:1.3145mg/ml，NR-CE 73.6%)

多模式介質(zhì)：MA Large Scale

層析柱：5ml預(yù)裝柱

線性流速：150cm/h

A液:50mM Na2HPO4-CA，pH8.0，cond 7.5mS/cm

B液: 50mM Na2HPO4-CA，1M NaCl，pH5.0，cond 92.7mS/cm

圖2：多模式層析pH和鹽雙梯度色譜曲線圖

多模式層析去除聚集體結(jié)果

多模式層析MA Large Scale 吸附-洗脫模式下用pH和鹽雙梯度洗脫，比單pH梯度或單鹽梯度洗脫有著更高的分辨率，NR-CE的去除率可達(dá)99.6%。

凝膠過(guò)濾層析去除抗體中的聚集體及片段

烯丙基葡聚糖高分辨率凝膠過(guò)濾介質(zhì)具有獨(dú)特的化學(xué)結(jié)構(gòu)和良好的理化性能，柱層析操作時(shí)能獲得很高的流速、分辨率和回收率。該層析介質(zhì)廣泛應(yīng)用于酶、多糖、核酸和蛋白質(zhì)等生物大分子的分離純化，γ-干擾素、白介素-Ⅱ、蛋白質(zhì)A和乙肝疫苗等生物制品生產(chǎn)過(guò)程中，且廣泛用于生物大分子單體和聚集體及片段的分離。

凝膠過(guò)濾層析去除抗體中的聚集體及片段案例

樣品：rProtein A Seplife Suno洗脫峰，SEC%（聚集體18.2，主峰80.8，片段1.6）

緩沖液：50mM Tris HAc 150mM Arg HCl pH7.0

層析填料：藍(lán)曉科技Seplife S-200

層析柱：藍(lán)曉科技16mm*700mm，裝填高度620mm

流速：2ml/min

層析結(jié)果：Seplife S-200層析介質(zhì)洗脫峰SEC%(片段0，主峰99.8，聚集體0.4），聚集體及片段去除率達(dá)到98%。

參考資料

[1] Y. Li, A brief introduction of IgG-like bispecific antibody purification: methods for removing product-related impurities, Protein Expr. Purif. 155 (2019) 112–119.

[2] J.B. Ridgway, L.G. Presta, P. Carter, 'Knobs-into-holes' engineering of antibody CH3 domains for heavy chain heterodimerization, Protein Eng. Des. Sel. 9 (1996) 617–621.

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