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          新聞資訊

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          抗體親和純化——rProtein A介質(zhì)的品質(zhì)評(píng)價(jià)方法

          2022-07-05 11:16:39

          簡(jiǎn)介

          rProtein A Seplife Suno/Suni是藍(lán)曉科技應(yīng)對(duì)抗體客戶(hù)需求推出的Protein A親和層析填料,以球形,高交聯(lián)瓊脂糖凝膠為基質(zhì),通過(guò)自主創(chuàng)新技術(shù)將耐堿性重組蛋白A鍵合到該基質(zhì)上??梢蕴禺愋缘嘏c抗體的Fc區(qū)結(jié)合,用于抗體(單抗和多抗)的分離純化,只需一步親和層析,即可從腹水、血清或培養(yǎng)液等樣品中得到高純度的抗體。

          使用設(shè)備及試劑

          (1)使用設(shè)備:蛋白純化系統(tǒng);

          (2)填料:rProtein A Seplife Suni/Suno,裝柱體積1ml;

          (3)批次:20211207201/20211208201;

          (4)樣品:人免疫球蛋白IgG,上樣量根據(jù)實(shí)際情況而定,C=2mg/ml;

          (5)流動(dòng)相A1:20mM PBS+0.15M NaCl,pH7.4;

          流動(dòng)相B:0.1M檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液,pH3.0;

          實(shí)驗(yàn)過(guò)程

          DBC測(cè)試(不同駐留時(shí)間)

          使用 AKTA pure層析系統(tǒng)編程進(jìn)行實(shí)驗(yàn),設(shè)定檢測(cè)波長(zhǎng)為280nm,deltaCp為0.3MPa,將層析柱接入系統(tǒng),設(shè)定流速為1.0ml/min,用流動(dòng)相B淋洗10cv,用流動(dòng)相A1平衡15cv;上樣流速分別設(shè)置為0.33ml/min,0.25ml/min,0.2ml/min,0.16ml/min(駐留時(shí)間分別對(duì)應(yīng)3min,4min,5min,6min),上樣至280nm處吸收值為90 mAu;設(shè)定梯度洗脫流動(dòng)相100%B,流速1.0ml/min,洗脫至基線(xiàn)平,收集洗脫液;最后,使用流動(dòng)相A1再生10ml,流速1.0ml/min。

          評(píng)價(jià)結(jié)果——不同駐留時(shí)間下載量及耐堿性

          對(duì)藍(lán)曉?xún)煽钐盍戏謩e測(cè)試了不同駐留時(shí)間下的動(dòng)態(tài)載量,結(jié)果如下:

          表1 藍(lán)曉rProtein A Seplife Suni及Suno不同駐留時(shí)間下動(dòng)態(tài)載量測(cè)試結(jié)果

          圖1 藍(lán)曉rProtein A Seplife Suni不同駐留時(shí)間下動(dòng)態(tài)載量測(cè)試結(jié)果

          圖2 藍(lán)曉rProtein A Seplife Suno不同駐留時(shí)間下動(dòng)態(tài)載量測(cè)試結(jié)果

          圖3 藍(lán)曉rProtein A Seplife Suni及Suno不同駐留時(shí)間下動(dòng)態(tài)載量測(cè)試結(jié)果

          (1)同期動(dòng)態(tài)載量用液相ProAqa Excel抗體親和分析色譜柱測(cè)定

          (2)一般要求動(dòng)態(tài)載量至少還有初始的70%以上

          實(shí)驗(yàn)結(jié)果

          1.由上述結(jié)果可以看出,在不同保留時(shí)間下,藍(lán)曉?xún)煽顁Protein A填料的DBC(動(dòng)態(tài)結(jié)合能力)數(shù)值都隨著駐留時(shí)間增加而增加,其中,5min的駐留時(shí)間與6min差異不大。

          2.從上述結(jié)果來(lái)看,本次試驗(yàn)中藍(lán)曉r-Protein A Seplife Suni在經(jīng)過(guò)100次0.5M NaOH循環(huán)后,動(dòng)態(tài)載量還保持在初始的70%以上,耐堿性明顯高于外樣。


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