絲氨酸蛋白酶是一個(gè)蛋白酶家族，它們的作用是斷裂大分子蛋白質(zhì)中的肽鍵，使之成為小分子蛋白質(zhì)。在哺乳類動(dòng)物里面，絲氨酸蛋白酶扮演著很重要的角色，特別是在消化，凝血和補(bǔ)體系統(tǒng)方面。其激活是通過活性中心一組氨基酸殘基變化實(shí)現(xiàn)的，它們之中一定有一個(gè)是絲氨酸。

絲氨酸蛋白酶的特點(diǎn)是具有獨(dú)特的結(jié)構(gòu)，由兩個(gè)在催化活性位點(diǎn)會(huì)聚的β-桶結(jié)構(gòu)域組成。這些酶可以根據(jù)它們的底物特異性進(jìn)一步分類為胰蛋白酶樣、胰凝乳蛋白酶樣或彈性蛋白酶樣。

胰蛋白酶樣

胰蛋白酶樣蛋白酶在帶正電荷的氨基酸（賴氨酸或精氨酸）之后切割肽鍵。這種特異性是由位于酶S1口袋底部的殘基驅(qū)動(dòng)的（通常是帶負(fù)電荷的天冬氨酸或谷氨酸）。

胰凝乳蛋白酶樣

胰凝乳蛋白酶樣酶的S1口袋比胰蛋白酶樣蛋白酶更疏水。這導(dǎo)致對(duì)中到大尺寸疏水殘基的特異性，例如酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸。

類凝血酶

類彈性蛋白酶

彈性蛋白酶樣蛋白酶的S1裂縫比胰蛋白酶或胰凝乳蛋白酶樣蛋白酶小得多。因此，殘基如丙氨酸、甘氨酸和纈氨酸往往是優(yōu)選的。

枯草桿菌蛋白酶

枯草桿菌蛋白酶是原核生物中的一種絲氨酸蛋白酶。枯草桿菌蛋白酶在進(jìn)化上與胰凝乳蛋白酶家族無(wú)關(guān)，但具有相同的催化機(jī)制，利用催化三聯(lián)體來產(chǎn)生親核絲氨酸。這是用來說明趨同進(jìn)化的經(jīng)典例子，因?yàn)橥粰C(jī)制在進(jìn)化過程中獨(dú)立進(jìn)化了兩次。

苯甲脒類物質(zhì)是絲氨酸蛋白酶的廣譜抑制劑，所以將這類物質(zhì)偶聯(lián)到瓊脂糖微球上，可從各種來源的樣品中一步純化胰蛋白酶、凝血酶、尿激酶、激肽釋放酶、前激肽釋放酶等絲氨酸蛋白酶。

苯甲瞇高流速瓊脂糖微球《Benzamidine Seplife 4FF》是藍(lán)曉科技自主研發(fā)的一種特異性結(jié)合絲氨酸蛋白酶的親和層析介質(zhì)，具有良好的化學(xué)穩(wěn)定性和生物相容性。它是將苯甲脒類物質(zhì)偶聯(lián)到高流速瓊脂糖凝膠過濾層析介質(zhì)上，可以從各種來源的樣品中進(jìn)一步純化胰蛋白酶，凝血酶，尿激酶，激肽釋放酶，前激肽釋放酶等絲氨酸蛋白酶。Benzamidine Seplife 4FF層析介質(zhì)運(yùn)用新的活化方法，具有流速高，非特異吸附少，分離效果好的特點(diǎn)，是純化絲氨酸蛋白酶類最合適的層析介質(zhì)。

Benzamidine Seplife 4FF推薦使用條件：

?平衡緩沖液：0.05mol/L Tris-HCl 0.5mol/L NaCl pH7.4

洗脫方式一般有3種：

?競(jìng)爭(zhēng)洗脫：在緩沖液中加入20mmol/L的p-氨基苯甲脒。

?pH洗脫：如0.05mol/L甘氨酸-HCl，pH3.0或者0.01mol/L HCl 0.5mol/L NaCl，pH2.0。

?變性洗脫：如在洗脫緩沖液中加入8M尿素或6M鹽酸胍等。

?注意：如果使用低pH洗脫條件，在收集的洗脫液中需要加入1M Tris-HCl, pH=9溶液，防止由于低pH導(dǎo)致的洗脫蛋白變性，一般每毫升洗脫液加入60-200ul。

?保存：保存條件為20%乙醇/乙酸緩沖液(乙酸緩沖液pH=4)，儲(chǔ)存溫度2～8℃。

更多信息請(qǐng)聯(lián)系蘇州藍(lán)曉生物：0512-65160522

應(yīng)用案例:胰蛋白酶親和層析純化

層析條件

層析柱：26mm*200mm ；裝柱高度：100mm；

裝填填料:Benzamidine Seplife 4FF

流速：5 ml/min；

緩沖液A：Tris-HCl + NaCl；

緩沖液B：Tris-HCl；

樣品說明：胰糜蛋白酶粗品

圖1：Benzamidine Seplife 4FF純化胰蛋白酶色譜圖

親和層析結(jié)果分析：應(yīng)用案例:胰蛋白酶親和層析純化

分別對(duì)原液、流穿液、洗脫液中蛋白濃度和胰糜蛋白酶的效價(jià)進(jìn)行測(cè)定。蛋白濃度通過紫外吸收法，效價(jià)測(cè)定根據(jù)中國(guó)藥典2015年版胰糜蛋白酶的效價(jià)測(cè)定方法。

中國(guó)藥典2015年版規(guī)定糜蛋白酶的效價(jià)不小于1000單位/mg；胰蛋白酶效價(jià)不得少于2500單位/mg。由此可以看出藍(lán)曉科技開發(fā)生產(chǎn)的Benzamidine Seplife 4FF親和層析介質(zhì)可以用來生產(chǎn)滿足藥典要求的胰蛋白酶和糜蛋白酶。