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          新聞資訊

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          減毒流感病毒載體疫苗下游工藝解決方案

          2021-12-18 18:37:49

          減毒流感病毒載體新冠疫苗:利用減毒的流感病毒作為載體,攜帶新冠S蛋白或S蛋白片段(如RBD),共同刺激人體產(chǎn)生針對(duì)兩種病毒的抗體。

          代表企業(yè):

          華蘭生物疫苗股份有限公司

          北京萬(wàn)泰生物藥業(yè)股份有限公司

          青島海華生物醫(yī)藥技術(shù)有限公司

          減毒流感病毒載體疫苗下游工藝解決方案

          01、細(xì)胞培養(yǎng)

          用蘇州藍(lán)曉生物科技的Seplife? LX-MC-dex1微載體培養(yǎng)MDCK細(xì)胞。微載體培養(yǎng)是目前公認(rèn)最具發(fā)展前途的一種動(dòng)物細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)技術(shù),其兼具懸浮培養(yǎng)和貼壁培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn),且容易放大。藍(lán)曉科技的微載體廣泛應(yīng)用在疫苗、單抗、基因治療病毒載體等生物制品的大規(guī)模生產(chǎn)中,藍(lán)曉科技自主研發(fā)的Seplife? LX-MC-dex1細(xì)胞培養(yǎng)微載體幾乎適合所有貼壁細(xì)胞(如Vero、CHO、293T及MDCK等),細(xì)胞可貼附微球 2D 表面生長(zhǎng),1g的Seplife? LX-MC-dex1微載體提供 4400 cm2的表面積給細(xì)胞貼附。

          圖1:Seplife? LX-MC-dex1細(xì)胞培養(yǎng)微載體培養(yǎng)效果(來(lái)源:藍(lán)曉科技)

          02、固液分離

          細(xì)胞培養(yǎng)后,先經(jīng)過(guò)離心的方式固液分離去除培養(yǎng)基中水及培養(yǎng)基組分中的物質(zhì);

          03、細(xì)胞洗滌

          固液分離后收集細(xì)胞,可以用生理鹽水重懸細(xì)胞,對(duì)細(xì)胞進(jìn)行洗滌(工業(yè)上此工序可省略),保持細(xì)胞破碎時(shí)破碎的是純凈的細(xì)胞;


          04、細(xì)胞重懸

          細(xì)胞洗滌后,重懸細(xì)胞,重懸細(xì)胞要注意重懸緩沖液的種類及和重懸后的細(xì)胞濃度,濃度影響后面破碎效率,緩沖液影響后續(xù)純化過(guò)程,盡量保持和下游工藝的合理銜接,避免置換緩沖液;

          05、細(xì)胞破碎

          重懸后可以用去污劑Tween20.Tween80.Triton X-100等破碎細(xì)胞,或者通過(guò)凍融的方式破碎細(xì)胞,破碎后可以測(cè)定病毒滴度,保證病毒全部釋放出來(lái);

          06、破碎液固液分離

          破碎后再次離心固液分離,收集上清;

          07、澄清

          上清液在用微濾(GF)的方式進(jìn)行澄清處理(要特別注意澄清度,澄清度是影響后續(xù)層析填料及超濾(UF)膜組件使用壽命的關(guān)鍵因素之一),澄清度可以通過(guò)測(cè)濁度的方式檢測(cè);

          08、核酸酶處理

          澄清后加入核酸酶處理,降解核酸降低粘度,考慮核酸酶活加入的量及酶處理時(shí)間,核酸酶處理時(shí)要緩慢攪拌,保證處理的均勻性;

          09、緩沖液置換

          用超濾膜組件進(jìn)行緩沖液置換,保證緩沖體系適合下一步層析過(guò)程,同時(shí)置換時(shí)也可以適當(dāng)濃縮,注意超濾時(shí)的跨膜壓及超濾時(shí)剪切力對(duì)病毒完整性的影響;若8工序后的樣品不影響粗純的層析過(guò)程(需要從細(xì)胞重懸工序開(kāi)始合理選擇緩沖液,及破碎方式的選擇考慮)此工序可省去;

          10、粗純

          減毒流感病毒載體新冠疫苗可用陰離子交換層析吸附——洗脫模式(大多數(shù)病毒在中性pH環(huán)境中都帶負(fù)電荷)進(jìn)行粗純及濃縮,推薦使用蘇州藍(lán)曉生物高剛性瓊脂糖微球陰離子交換填(Seplife large scale Q ),離子交換層析的過(guò)程,病毒被吸附在填料上,吸附的過(guò)程也會(huì)把病毒濃縮在填料上,蘇州藍(lán)曉生物的Seplife large scale Q填料吸附減毒流感病毒載體的載量在1-3mg/ml(與工藝緩沖液,層析時(shí)保留時(shí)間等有關(guān)),用陰離子交換層析吸附——洗脫模式粗純減毒流感病毒載體新冠疫苗時(shí),可以運(yùn)用DOE,系統(tǒng)的表征各個(gè)層析工藝參數(shù),達(dá)到最優(yōu)的純化結(jié)果(回收率和純度),減輕后續(xù)精純工序的壓力;

          同時(shí)也可以用蘇州藍(lán)曉生物的混合模式層析介質(zhì)Seplife? Suncore 700來(lái)粗純,病毒顆粒被排阻在惰性層外流穿,HCP,HCD,內(nèi)毒素等雜質(zhì)進(jìn)入活性區(qū)域和介質(zhì)以靜電力,疏水作用力結(jié)合,從而實(shí)現(xiàn)分離。

          圖2:混合模式層析介質(zhì)分離減毒流感病毒載體疫苗原料示意圖(自制)

          11、精純

          粗純得到樣本,在通過(guò)凝膠過(guò)濾層析進(jìn)一步精細(xì)純化,減毒流感病毒載體分子尺寸比較大(如H1N1病毒分子尺寸在80-120nm,不同型的流感病毒分子尺寸有差異),蘇州藍(lán)曉生物Seplife 4FF瓊脂糖基質(zhì)凝膠過(guò)濾填料的平均孔徑在50nm,用此填料減毒流感病毒載體新冠疫苗被排阻在填料孔道外部,通過(guò)填料顆粒間隙流穿,而其它雜質(zhì)如HCP,HCD,核酸酶等分子尺寸比較小,進(jìn)入道填料通過(guò)擴(kuò)散的作用進(jìn)入道填料孔道內(nèi)部,然后在通過(guò)擴(kuò)散的作用散出填料孔道,這個(gè)過(guò)程中同樣的緩沖液作用,擴(kuò)散過(guò)程需要更多的熱力學(xué)動(dòng)力(即需要更多的緩沖液作用),而伴隨緩沖液流動(dòng)的病毒粒子需要的動(dòng)力小伴隨緩沖液一起流出,通過(guò)整個(gè)凝膠過(guò)濾柱床反復(fù)的分離,病毒顆粒在填料柱床的外水體積(即填料顆粒之間的間隙空間,約占柱床體積的30%),病毒分子最先流出柱床,其它物質(zhì)后面流出柱床,即可實(shí)現(xiàn)減毒流感病毒載體新冠疫苗的精細(xì)純化。

          12、超濾濃縮

          超濾濃縮換液及調(diào)整病毒粒子濃度

          13、除菌過(guò)濾及制劑分裝

          0.22um除菌過(guò)濾后,在制劑化及包裝。

          蘇州藍(lán)曉生物科技有限公司

          細(xì)胞培養(yǎng)微載體

          Seplife? LX-MC-dex1

          高剛性瓊脂糖微球陰離子交換介質(zhì)

          Seplife large scale Q

          高剛性高分辨率瓊脂糖微球陰離子交換介質(zhì)

          Seplife large scale Q HP

          多模式復(fù)合型層析填料

          Seplife? Suncore 700

          凝膠過(guò)濾層析填料

          Seplife 4FF

          蘇州藍(lán)曉生物科技有限公司,生物制藥下游工藝解決方案專業(yè)供應(yīng)商!

          —— 代表產(chǎn)品 ——

          ?高流速瓊脂糖介質(zhì)

          離子交換填料:DEAE/Q/CM/SP seplife? FF等

          凝膠過(guò)濾填料:seplife? 4FF/6FF等

          疏水填料:Phenyl/Butyl seplife? FF等

          親和填料:Ni/Blue/rProtein A seplife? FF等

          ?超高載量瓊脂糖介質(zhì)

          DEAE/Q/CM/SP seplife? XL等

          ?葡聚糖介質(zhì)

          凝膠過(guò)濾填料:seplife?  G25/G50/G75等

          離子交換填料:DEAE/Q seplife? A25/A50等

          CM/SP seplife? C25/C50等

          ?高剛性瓊脂糖介質(zhì)

          seplife? large scale Q/SP/DEAE等

          ?聚合物介質(zhì)

          seplife?RP/IEX/HIC等

          ?多模式介質(zhì)

          seplife? large scale MMC/MMC(Ⅱ)等

          seplife? large Suncore 700等

          seplife? LH-20等

          ?細(xì)胞培養(yǎng)微載體

          seplife? LX-MC-dex 1等

          ?核酸固相合成載體

          交聯(lián)苯乙烯(羥基、氨基)等

          ?多肽合成載體

          Merrifield樹(shù)脂/Wang 樹(shù)脂等

          ?酶固定化載體

          seplife? LX-505P/LX-1000EP/EP200等

          現(xiàn)高流速瓊脂糖介質(zhì),超高載量瓊脂糖介質(zhì),高剛性瓊脂糖介質(zhì),葡聚糖介質(zhì),單分散聚合物介質(zhì),多模式介質(zhì),細(xì)胞培養(yǎng)微載體,核酸固相合成載體,多肽固相合成載體,酶固定化載體等年產(chǎn)均超過(guò)50000升。





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