IMAC Seplife FF(NTA)是藍曉科技自主研發(fā)的一種新型親和層析介質，具有良好的化學穩(wěn)定性和生物相容性，是將亞氨基二乙酸基鍵合在高流速瓊脂糖凝膠過濾層析介質上制備的一種親和層析介質。

使用方法

預處理:可以根據(jù)實際需要螯合金屬。

填料螯合好后，按照以下流程使用。

3.1 裝柱

裝柱按照標準操作規(guī)程操作。必須保證每種材料都處于工作溫度，凝膠裝柱前需要脫氣。

3.2平衡

用2~5個柱床體積的初始緩沖溶液進行平衡，直至電導率、pH值等參數(shù)不變。

3.3上樣

（1）樣品一般溶解于pH6～8的初始緩沖液中，提高上樣緩沖液的pH值可以增大載量。

（2）緩沖液中不能含有EDTA和檸檬酸鹽，同時最好避免巰基乙醇、DTT等還原劑。

（3）常用緩沖液有10～100mmol/L磷酸鈉緩沖液、20～200mmol/LTris-HCl緩沖液等。

（4）緩沖液中一般要加入0.15～0.5mol/L的NaCl以消除離子交換作用。

（5）初次使用鎳螯合瓊脂糖凝膠時，推薦使用50mmol/L PBS（50 mmol/L NaH2PO4，0.5 mol/L NaCl，pH 7.4）作為初始緩沖液。

3.4洗脫

洗脫一般分為以下幾種方法：

（1）降低pH洗脫：大多數(shù)蛋白在pH 6～4會被洗脫下來（也可以在pH 3～4），緩沖液可以是醋酸鈉、檸檬酸和磷酸鹽緩沖體系。

（2）競爭性洗脫：線性增加或一步增加同金屬離子有親和力的競爭物質的濃度（如0～0.5mol/L咪唑、0～50 mmol/L組氨酸、0～2mol/L NH4Cl）。

（3）螯合劑洗脫：EDTA、EGTA 等螯合劑可同金屬離子產(chǎn)生作用力會使蛋白被洗脫下來。但是此法不能分離不同的蛋白，會影響蛋白的吸附，導致融合蛋白無法掛柱。

備注：（1）初次使用時，如不確定洗脫需要的咪唑濃度，推薦在初始緩沖液中分別加入10mmol/L、20mmol/L、50mmol/L、100mmol/L、200mmol/L、500mmol/L咪唑，濃度從低到高分別洗脫和收集重組蛋白，之后通過SDS-PAGE電泳等方法鑒定洗脫結果。

（2）咪唑為堿性，相應緩沖液配制后需要用HCl調節(jié)pH值。

（3）降低pH洗脫和螯合劑洗脫會使金屬離子脫落，下次使用前需重新螯和金屬離子。

（4）有條件的可以進行咪唑梯度線性洗脫以確定較佳的洗脫條件。

上述洗脫方法，均須在緩沖液中加入150～500mmol/L的NaCl以消除離子交換作用。

3.5 再生

（1）多次使用后或需要更換螯合的金屬離子時，必須將凝膠脫鎳再生。脫鎳方法：首先用5～10個柱床體積的蒸餾水淋洗柱子，然后用5～10個柱床體積的100mmol/L EDTA淋洗柱子，最后用2～3個柱床體積的0.5mol/L NaCl洗掉殘留的EDTA。

（2）多次使用的柱子脫鎳后一般需要清洗。清洗方法：用0.1～1.0 mol/L NaOH反向清洗柱子，50 cm/h保持1～2 h，不僅可以去除結合強的雜質，也可以去除熱源。

（3）清洗后需要重新螯合金屬離子。螯合方法：首先用2～5個柱床體積的蒸餾水充分平衡脫鎳后的柱子，然后用0.1～0.3mol/L金屬鹽溶液過柱5～10個柱床體積以螯合金屬離子，最后用5～10個柱床體積的蒸餾水淋洗以去除未螯合的金屬離子。

3.6在位清洗

（1）去除因離子交換作用吸附的蛋白：用2mol/L NaCl溶液反向清洗2～3個柱床體積。

（2）去除強疏水性蛋白和脂質等：用70%乙醇或者30%異丙醇反向清洗4個柱床體積。

（3）除去沉淀蛋白、疏水性蛋白：參照凝膠再生步驟。

3.7存儲

密封保存在4~30℃（保存溶液為20%乙醇）干燥、通風、清潔處，不可冷凍；用過的柱子保存在4~8℃，20%乙醇溶液中。

3.8運輸

運輸中避免日曬、雨淋、重壓，嚴禁與有毒、有害物品混運。

注意事項

（1）樣品與填料必須用洗脫緩沖液徹底平衡后，才能進行柱層析。 

（2）所裝的柱床必須表面平整，無溝流及氣泡，否則應重裝。

（3）使用時保證柱子和緩沖液的溫度一致，避免柱床內產(chǎn)生氣泡，影響純化效果。

（4）洗脫過程中應嚴格控制流速，且勿過快。

（5）加樣及整個洗脫過程中，嚴防柱面變干。

生產(chǎn)日期：見標簽

使用期限：在適當?shù)馁A藏條件下可貯藏5年

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