rProtein G Seplife 4FF層析介質(zhì)是藍(lán)曉科技自主研發(fā)的一種新型親和層析介質(zhì)，是將重組蛋白G偶聯(lián)到4%高流速瓊脂糖凝膠過濾層析介質(zhì)上，它可用于分離純化細(xì)胞培養(yǎng)液或細(xì)胞提取物中不同種屬的抗體或抗體的Fc片段。重組蛋白G高流速瓊脂糖層析介質(zhì)采用多位點(diǎn)活化偶聯(lián)，有效減少了配基的脫落，用于lgG單克隆抗體的實(shí)驗(yàn)室規(guī)模和工業(yè)化大規(guī)模純化，能迅速處理大體積樣品，提高生產(chǎn)效率。

使用方法

3.1 裝柱

裝柱按照標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程操作。必須保證每種材料都處于工作溫度，凝膠裝柱前需要脫氣。

3.2平衡

用2～5個(gè)柱床體積的初始緩沖溶液進(jìn)行平衡，直至pH和電導(dǎo)率保持不變。

3.3上樣

樣品的預(yù)處理：樣品需先用0.45μm濾膜過濾，然后上樣，以免堵塞層析柱。上樣量根據(jù)樣品的性質(zhì)和層析介質(zhì)的量進(jìn)行選擇，也可通過線性實(shí)驗(yàn)找到最佳上樣量。

3.4洗脫

 一般利用降低pH進(jìn)行洗脫：如0.1mol/L甘氨酸-HCl，pH3.0。洗脫后，應(yīng)立刻中和緩沖液，將收集到的抗體溶液中和至中性（pH7.4左右），以維持抗體的生物活性，一般中和液為1mol/L Tris-HCl，pH8.5。

3.5 再生

首先用0.1mol/L，pH3.0檸檬酸鈉緩沖液洗3～5個(gè)柱床體積，然后用2～3個(gè)柱床體積的平衡緩沖液清洗，最后將柱子置于2～8℃環(huán)境中。 

3.6在位清洗

（1）對于沉淀或變性物質(zhì)，可先用2倍柱床體積的6mol/L的鹽酸胍溶液進(jìn)行清洗，然后用5倍柱床體積的PBS，pH7.4清洗，直至pH和電導(dǎo)保持不變。

（2）對于強(qiáng)疏水性蛋白、脂蛋白和脂質(zhì)等，可先用3～4倍70%乙醇或2倍柱床體積的非離子去污劑（濃度0.1%）清洗，在37℃洗柱子1min，最后立即用平衡液洗5個(gè)柱床體積，直至pH和電導(dǎo)保持不變。

3.7存儲

密封保存在4~8℃（保存溶液為20%乙醇）干燥、通風(fēng)、清潔處，不可冷凍；用過的柱子保存在4~8℃，20%乙醇溶液中。

3.8運(yùn)輸

運(yùn)輸中避免日曬、雨淋、重壓，嚴(yán)禁與有毒、有害物品混運(yùn)。

4.注意事項(xiàng)

（1）該介質(zhì)從冷室或冰箱中取出后最好在室溫下恢復(fù)到室溫，然后緩慢搖勻后裝柱，以免產(chǎn)生氣泡影響柱效。

（2）裝柱時(shí)盡可能維持長徑比5：3~2：1，長徑過大將導(dǎo)致洗脫峰拖尾，洗脫體積增大；長徑過小將導(dǎo)致樣品和介質(zhì)接觸時(shí)間過少，吸附不充分，介質(zhì)吸附蛋白量小。

（3）若上樣液中抗體濃度過高，應(yīng)用平衡緩沖液稀釋至1~2mg/ml，以免上樣濃度過高影響柱效。

（4）凝膠用低pH緩沖液洗脫的時(shí)間應(yīng)盡可能短，洗脫后用中性緩沖液盡快洗到pH中性，以延長介質(zhì)的使用壽命。

（5）通常介質(zhì)使用后應(yīng)用0.1M檸檬酸鈉緩沖液（pH3.0）做再生處理，然而長期采用極端的洗脫條件會縮短介質(zhì)的使用壽命。

生產(chǎn)日期：見標(biāo)簽

使用期限：在適當(dāng)?shù)馁A藏條件下可貯藏5年

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